El Servicio de Microscopía proporciona el equipamiento, la asistencia técnica y la formación especializada necesaria para analizar visualmente la estructura microscópica de muestras biológicas y de otros materiales. La preparación de las muestras y el uso de los microscópios puede ser realizada por el técnico especialista del laboratorio en el caso de usuarios inexpertos en estas técnicas. Es aconsejable consultar con el personal del laboratorio los requerimientos técnicos necesarios para obtener las muestras que se desean evaluar microscópicamente.
- Microscopía Electrónica de Transmisión
- Microscopía Electrónica de Barrido
- Microscopía láser confocal
- Microscopía de alta sensibilidad
- Microscopio directo Eclipse Ni-E (Nikon) (Cámara Photometrics BSI)
- Microscopía de fluorescencia
- Microscopio invertido TE300 (Nikon) (Cámara DXM1200F Nikon)
- Microscopio directo E600 (Nikon) (Cámara DS-L1 Nikon)
- Microscopio directo BX61 (Olympus) (Cámara DP70 Olympus)
- Lupa SMZ 1500 (Nikon) (Cámara DS-L1)
- Lupa SMZ 25 (Nikon) con epifluorescencia (Cámara DS-Ri2)
- Sistema de microscopía virtual DotSlide (Olympus)
- Microtomo de congelación HM 450 (Microm)
- Criostato LEICA CM1950
- Citometría de flujo
- Sistema de Análisis de Imagen
- Mantenimiento y limpieza de microscopios ópticos
- BioBanco ULe
Microscopía Electrónica de Transmisión
Equipamiento
Microscopio Electrónico de Transmisión JEOL 1010
Ultramicrotomos LKB IV y ULTRACUT Reichert-Jung
Cortador de cuchillas de vidrio LKB 7800
La microscopía electrónica de transmisión se basa en un haz de electrones que manejado a través de lentes electromagnéticas se proyecta sobre una muestra muy delgada situada en una columna de alto vacio. El haz de electrones atraviesa la muestra, que ha sido contrastada con átomos pesados, y se pueden dar dos situaciones básicas: que los electrones del haz atraviesen la muestra o que choquen con un átomo de la muestra y terminen su viaje. De este modo se obtiene información estructural específica de la muestra según las pérdidas específicas de los diferentes electrones del haz.
El conjunto de electrones que atraviesan la muestra son proyectados sobre una pantalla fluorescente formando una imagen visible o sobre una placa fotográfica registrando una imagen latente. Este equipo permite evaluar detalladamente las estructuras físicas y biológicas proporcionando unos 120.0000 aumentos sobre la muestra.
Las muestras a estudiar requieren una preparación compleja específica y la obtención de secciones ultrafinas mediante ultramicrotomía. La idoneidad de estas técnicas de preparación son decisivas en la calidad final de la imagen observada. En el caso de determinadas muestras biológicas tales como bacterias, macromoléculas y otras pequeñas partículas se requieren técnicas especiales de preparación. Para estos casos se han desarrollado técnicas específicas tales como obtención de réplicas, sombreado, tinción negativa, etc.
Microscopía Electrónica de Barrido
Equipamiento
Microscopio Electrónico de Barrido JEOL 6100
Punto crítico LEICA
CPD 300
Recubridor de muestras LEICA ACE 200
La microscopía barrido (SEM) permite el análisis de superficies de las muestras biológicas o de materiales con unos aumentos prácticos de 60.000x. En este modelo de microscopio, el haz de electrones, enfocado por las lentes electromagnéticas a través de una columna con alto vacio, se proyecta sobre la superficie de la muestra donde los electrones rebotan o provocan la emisión de electrones secundarios de la muestra. Estos electrones dispersados o emitidos son recogidos por unos detectores y proyectados sobre una pantalla de televisión que proporciona una imagen tridimensional del objeto. La muestra en este microscopio tiene unos requerimientos de preparación menos restrictivos que en el TEM pudiendo ser más voluminosa. Las muestra biológicas requieren un proceso de desecado y un recubrimiento con una película de un metal conductor.
Microanálisis de rayos X
Equipamiento
Espectro de elementos obtenido con el sistema de microanálisis de rayos X
La emisión de radiaciones en la microscopía electrónica de barrido comprende un amplio espectro de rayos X que evaluados por un detector específico proporcionan una completa información de la composición química de los objetos. Este análisis espectométrico de rayos X, simultáneo con la observación estructural, suministra una información cualitativa y cuantitativa de la composición elemental de la muestra. De este modo se obtienen mapas de distribución de elementos químicos sobre la imagen del objeto.
Microscopía láser confocal
Equipamiento
Microscopio confocal LSM 800 (Observer Z1, Zeiss)
Microscopio confocal C1 (TE2000, Nikon)
Los nuevos métodos de investigación de la ciencia biomédica, que exigen un conocimiento profundo de la biología de la célula y de los tejidos, requieren en la actualidad obtener imágenes de la arquitectura tridimensional de la célula. Esta imágenes estructurales que incorporan la tercera dimensión, perdida en la microscopía convencional, permitirán evaluar toda la información que proporcionan los diferentes métodos de marcaje celular (fluorescencia, citoquímica, ..). El microscopio de barrido confocal proporciona las bases para obtener distintas secciones ópticas de una misma muestra e integrar todas ellas en una imagen tridimensional única con un nivel de información cualitativo y cuantitativo muy alto.
Citometría de flujo
Equipamiento
Citómetro de flujo FAC Sort BECTON DICKINSON
Poblaciones definidas en una muestra de células con doble marcaje
Las células marcadas con un colorante fluorescente son valoradas individualmente por un detector láser que las identifica por su tamaño y su coloración. Esto permite identificar dentro de una población compleja grupos celulares según el patrón de su fluorescencia y valorar sus implicaciones funcionales. La disponibilidad de varios láseres permite ampliar el rango de longitudes de onda de trabajo lo que proporciona un aumento significativo de la potencia de análisis de los citómetro mejorando su nivel de resolución. Esta característica permite estudios con marcajes complejos y simultáneos con seis colores o más. El citómetro AMNIS tiene la particularidad de añadir una imagen digital de la célula a cada registro de señal fluorescente convencional y de este modo permite evaluar simultáneamente la distribución y la intensidad de la señal de fluorescencia ampliando las posibilidades de análisis de los fenómenos estudiados.
Sistema de Análisis de Imagen
Equipamiento
Programa de análisis de imagen NIS Elements (NIKON)
La obtención de imágenes microscópicas es un proceso básico en numerosos campos de la investigación. La evaluación de la información contenida en dichas imágenes ha mejorado mediante el desarrollo de algoritmos inteligentes basados en sistemas informáticos. Estos programas de análisis evalúan la imagen en su formato digital y mediante sistemas expertos nos ofrecen una base numérica de la información contenida en la imagen. La microfotometría valora el marcaje presente en una imagen obtenido por cualquier procedimiento habitual en microscopía (inmunofluorescencia, citoquímica, etc.) y calcula una amplia gama de parámetros numéricos en la imagen que permiten el análisis estadístico de la señal a estudiar.
Biobanco ULe
Equipamiento
• Almacenamiento en nitrógeno líquido (RCB 500 Air Liquide).
• Almacenamiento a -80 ºC (Innova U725 New Brunswick).
El Servicio de Microscopía gestiona las instalaciones de Biobanco de la ULe que permite el almacenamiento, con un máximo nivel de seguridad, de biomateriales en dos condiciones ambientales: tanques de nitrógeno líquido (-196 ºC) o ultracongeladores (-80 ºC). El nivel de seguridad se alcanza incorporando los automatismos que aseguren que la muestra no pierde en ningún momento las condiciones óptimas de almacenamiento (suministro continuo de N2 líquido desde un tanque nodriza con control telemático de carga y sistema de backup de CO2 en los congeladores) y que el usuario trabaje en unas condiciones adecuadas (detectores de hipoxia y sistema forzado de renovación contínua de atmosfera).
Mantenimiento y limpieza de microscopios ópticos
Equipamiento
Esquema básico de un microscopio
Los microscopios ópticos y lupas binoculares precisan para su correcto funcionamiento de un mantenimiento periódico que comprende la limpieza de sus componentes ópticos así como la alineación de sus sistemas mecánicos.
