{"id":169,"date":"2011-05-18T07:06:40","date_gmt":"2011-05-18T07:06:40","guid":{"rendered":"http:\/\/servicios.unileon.es\/lti-ir\/?page_id=169"},"modified":"2020-04-07T12:11:24","modified_gmt":"2020-04-07T12:11:24","slug":"pcr-a-tiempo-real","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/servicios.unileon.es\/lti-ir\/lti\/area-de-analisis-de-acidos-nucleicos\/pcr-a-tiempo-real\/","title":{"rendered":"PCR a Tiempo Real"},"content":{"rendered":"<p><img decoding=\"async\" src=\"http:\/\/www.unileon.es\/ficheros\/investigacion\/ltiir\/pcr.jpg\" alt=\"PCR\" class=\"floatright\" \/>Esta reciente t\u00e9cnica est\u00e1 demostrando ser una excelente herramienta para la identificaci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n de \u00e1cidos nucleicos. Entre las numerosas aplicaciones que se est\u00e1n desarrollando figuran los estudios de cuantificaci\u00f3n absoluta o relativa de perfiles transcripcionales, medida de n\u00famero de copias de un gen en DNAs gen\u00f3micos o virales, estudios de discriminaci\u00f3n al\u00e9lica (SNPs) (detecci\u00f3n de polimorfismos a nivel de nucle\u00f3tidos), ensayos de detecci\u00f3n e identificaci\u00f3n de pat\u00f3genos y de OMGs, etc.<\/p>\n<p>El Servicio dispone de dos equipos. El ABI PRISM 7000 de APPLIED BIOSYSTEM y el SMARTCYCLER de CEPHEID.<\/p>\n<p>El ABI PRISM est\u00e1 basado en un sistema \u00abPeltier\u00bb compatible con placas \u00abstandard\u00bb de 96 pocillos o con tubos \u00abeppendorf\u00bb de 0,2 ml. Las estrategias de marcaje disponibles se basan en sondas Taqman o SYBR green. La detecci\u00f3n de la fluorescencia se realiza mediante filtros de emisi\u00f3n optimizados para el uso de los fluor\u00f3foros FAM&trade;\/SYBR&reg; Green 1, VIC&trade;\/JOE, NED&trade;\/TAMRA&trade; y ROX&trade;. El dise\u00f1o de los cebadores y sondas est\u00e1 asistido mediante el software \u00abPrimer Express v2.0\u00bb, a disposici\u00f3n de los usuarios del Servicio.<\/p>\n<p><strong><img decoding=\"async\" src=\"http:\/\/www.unileon.es\/ficheros\/investigacion\/ltiir\/pcr2.jpg\" alt=\"PCR\" class=\"floatleft\" \/><\/strong>El equipo SMARTCYCLER est\u00e1 basado en 16 bloques de calentamiento y de detecci\u00f3n independientes (m\u00f3dulos I-Core), de manera que se puede trabajar hasta con 16 tubos de 25 \u00f3 100 ml con condiciones diferentes para cada una de ellos, haci\u00e9ndolo ideal para la optimizaci\u00f3n de protocolos o para el trabajo de varios usuarios a la vez. Posee 4 canales de excitaci\u00f3n\/emisi\u00f3n posibilit\u00e1ndole trabajar con cualquier fluor\u00f3foro del mercado, tanto intercalantes (SYBR Green, EtBr), sondas de hibridaci\u00f3n (Taqman, molecular Beacons) o &ldquo;primers marcados&rdquo; (Scorpion, Ampilifluor).<\/p>\n<p><strong>Nota<\/strong>: El fluor\u00f3foro ROX presente en algunos kits comerciales puede dar interferencias en alguno de los canales del SmartCycler, por lo que no se recomienda su utilizaci\u00f3n.<\/p>\n<p>El Servicio se encargar\u00e1 de realizar la reacci\u00f3n de PCR a partir de los DNA y &ldquo;primers&rdquo; espec\u00edficos facilitados por el cliente. Adicionalmente, el uso del los equipos de PCR a Tiempo Real est\u00e1 tambi\u00e9n a disposici\u00f3n de la Comunidad Universitaria bajo el asesoramiento del personal del Servicio. Los Grupos de Investigaci\u00f3n de Organismos P\u00fablicos o Privados que quieran utilizar esta t\u00e9cnica deben ponerse en contacto con el Director del Laboratorio de T\u00e9cnicas Instrumentales o con el Responsable de la L\u00ednea, Dr. Benjam\u00edn Rabanal.<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Esta reciente t\u00e9cnica est\u00e1 demostrando ser una excelente herramienta para la identificaci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n de \u00e1cidos nucleicos. 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