Esta reciente técnica está demostrando ser una excelente herramienta para la identificación y cuantificación de ácidos nucleicos. Entre las numerosas aplicaciones que se están desarrollando figuran los estudios de cuantificación absoluta o relativa de perfiles transcripcionales, medida de número de copias de un gen en DNAs genómicos o virales, estudios de discriminación alélica (SNPs) (detección de polimorfismos a nivel de nucleótidos), ensayos de detección e identificación de patógenos y de OMGs, etc.
El Servicio dispone de dos equipos. El ABI PRISM 7000 de APPLIED BIOSYSTEM y el SMARTCYCLER de CEPHEID.
El ABI PRISM está basado en un sistema «Peltier» compatible con placas «standard» de 96 pocillos o con tubos «eppendorf» de 0,2 ml. Las estrategias de marcaje disponibles se basan en sondas Taqman o SYBR green. La detección de la fluorescencia se realiza mediante filtros de emisión optimizados para el uso de los fluoróforos FAM™/SYBR® Green 1, VIC™/JOE, NED™/TAMRA™ y ROX™. El diseño de los cebadores y sondas está asistido mediante el software «Primer Express v2.0», a disposición de los usuarios del Servicio.
El equipo SMARTCYCLER está basado en 16 bloques de calentamiento y de detección independientes (módulos I-Core), de manera que se puede trabajar hasta con 16 tubos de 25 ó 100 ml con condiciones diferentes para cada una de ellos, haciéndolo ideal para la optimización de protocolos o para el trabajo de varios usuarios a la vez. Posee 4 canales de excitación/emisión posibilitándole trabajar con cualquier fluoróforo del mercado, tanto intercalantes (SYBR Green, EtBr), sondas de hibridación (Taqman, molecular Beacons) o “primers marcados” (Scorpion, Ampilifluor).
Nota: El fluoróforo ROX presente en algunos kits comerciales puede dar interferencias en alguno de los canales del SmartCycler, por lo que no se recomienda su utilización.
El Servicio se encargará de realizar la reacción de PCR a partir de los DNA y “primers” específicos facilitados por el cliente. Adicionalmente, el uso del los equipos de PCR a Tiempo Real está también a disposición de la Comunidad Universitaria bajo el asesoramiento del personal del Servicio. Los Grupos de Investigación de Organismos Públicos o Privados que quieran utilizar esta técnica deben ponerse en contacto con el Director del Laboratorio de Técnicas Instrumentales o con el Responsable de la Línea, Dr. Benjamín Rabanal.
