El análisis del tamaño de los fragmentos de DNA permite numerosas aplicaciones como es el estudio de microsatélites en una población, estudios de DNA fingerprinting mediante técnicas AFLPs, pruebas de paternidad, pruebas forenses, etc.

Se pueden utilizar hasta 4 marcadores fluorescentes simultáneamente (uno de ellos reservado para el marcador de tamaños moleculares) y combinar diferentes tamaños alélicos en la misma muestra por lo que por cada capilar en una misma electroforesis se pueden analizar multitud de fragmentos.

Requisitos de las Muestras

Dada la especificidad de la técnica el Servicio se hará cargo únicamente de la etapa final, es decir, de la separación y análisis de los fragmentos mediante electroforesis. La tarifa que se le aplicaría sería la correspondiente a «Sólo electroforesis» (ver tarifas más adelante).

Las muestras deben ser presentadas en placas de 96 pocillos compatibles con el MEGABace 500 (las placas deben tener «faldón») y ya preparadas para ser analizadas. En el Servicio se les proporcionará todas las indicaciones necesarias al respecto.

Los marcadores fluorescentes compatibles con el equipamiento son FAM, TET, HEX y ET-ROX. Para la determinación de los tamaños el Servicio dispone del marcador de pesos moleculares «MegaBACE ET-400-R», con un total de 20 fragmentos en un rango entre 60 y 400 pb y con emisión de fluorescencia a 610 nm (ET-ROX), si bien puede usarse cualquier otro marcador de tamaño con ET-ROX aportado por el usuario.

Debe evitarse el uso de aceite mineral en las reacciones de PCR.

En algunos casos puede ser necesario un paso de purificación de los fragmentos (precipitación con etanol o purificación con «kits» específicos) antes del proceso de electroforesis.